3M™ PETRİFİLM KOLİFORM SAYIM PLAKALARI YORUMLAMA KILAVUZU

! Bu kılavuz, 3M™ Petrifilm™ Koliform Sayım Plakaları'nın sonuçlarını yorumlamanıza yardımcı olmak üzere hazırlanmıştır. Ayrıntılı bilgi için lütfen size en yakın 3M™ Mikrobiyoloji Ürünleri temsilcisine danışınız.


Petrifilm CC plakalarında kullanıma hazır Mor Kırmızı Safra (VRB) besinleri, soğuk suda eriyen jel bileşeni, ve koloni­lerin sayılmasını sağlayan tetrazoliyum göstergesi bulunmaktadır. Üst tabaka, laktozu fermente eden koliformların ürettiği gazı tutar. Hem inkübasyon süresi ve sıcaklığı, hem de Petrifilm CC plakalarını yorumlama, seçilen yönteme göre değişir.

  • ISO standartlarında, koliformlar yönteme özgü belirli bazı ortamlarda çoğalan bakteriler olarak tanımlanmaktadır. ISO
    4832     yönteminde koliformlar koloni sayım tekniği uygulanarak sayılır, koloninin büyüklüğüne ve laktoz (VRBL) ağar ile
    VRB üzerinde asit üretimine dayanılarak saptanır. Söz konusu asit üreten koliformlar, Petrifilm CC plakalarında gaz içeren
    ya da içermeyen kırmızı koloniler (bkz. l no.lu daire) halinde gösterilir. ISO 4831 yönteminde ise koliformlar En Olası
    Sayı (MPN) yöntemi ile sayılır, çoğalma oranına ve belirli bir et suyu içinde laktozdan gaz üretme özelliklerine
    dayanılarak saptanır. Petrifilm CC plakalarında bu koliformlar gaz ile bağlantılı kırmızı koloniler (bkz. 2 no.lu daire)
    halinde gösterilir.
  • AOAC INTERNATIONAL ile A.B.D. Gıda ve İlaç Dairesi tarafından hazırlanan Bakteriyolojik Analitik Kitabı'nda
    (BAM) koliformlar şu şekilde tanımlanmaktadır: Metabolik fermantasyon sırasında laktozdan asit ve gaz üreten gram-
    negatif çubuk bakteriler. Petrifilm CC plakasında koloniler çoğaldıkça ve asit ürettikçe, pH göstergesi, jel rengini koyulaştırır. Kırmızı koloniler çevresinde kalan gaz, koliformları gösterir (bkz. 2 no.lu daire).

Şekil 1: Gaz üreten koloni sayısı: 75
Gaz üretmeyen koloni sayısı: 24
Toplam sayı: 99
 

Petrifilm CC plakaları, hem toplam koliformu hem de termo-tolerant (dışkı) koliformu saptamak için tasarlanmıştır.

AOAC, AFNOR VE NMKL, Petrifilm CC plakalarının belirli bazı koşullar altında kullanılmasına onay vermiştir.


Şekil 2: Çoğalma yok Koloni sayısı = O
 



Geri planda kabarcıklar olması jelin özelliğidir, koliform çoğalmasının sonucu değildir. Geri plandaki gaz kabarcıklarının boyutu küçük ile iğne başı kadar arasında değişir, bunlara bağlı koloniler yoktur.



Şekil 3: Gaz üreten koloni sayısı: 8
Gaz üretmeyen koloni sayısı: 7
Toplam sayı: 15
 



Şekil 3'te kabarcık şekillerinin nasıl farklı olabileceği gös­terilmiştir. Bazen gaz koloniyi dağıtır, böylece koloni kabarcığı "çevreler" (bkz. l ve 2 no.lu daireler). Gaz kabarcıkları genelde yaklaşık bir koloni çapındadır. Özel şekilli kabarcıklar, Petrifilm CC plakasında yanlış aşılama yapılmasından veya numune içinde hava kalmasından meydana gelir. Bunlar düzensiz biçimlidir, koloni ile bağıntılı değildir (bkz. 3 no.lu daire).



Şekil 4: Gaz üreten koloni sayısı: 83
Gaz üretmeyen koloni sayısı: 29
Toplam sayı: 112
  



Petrifilm CC plakalarında tercih edilen sayım alanı (toplam koloni nüfusu) 15-150 koloni arasındadır. Köpük barajında meydana gelen kolonileri saymayın, çünkü bunlar ortamın seçici etkisiyle yok olur (bkz. l no.lu daire).



Şekil 5: Yaklaşık toplam sayı: 310

  



Petrifilm CC plakasının yuvarlak çoğalma alanı yaklaşık 20 cm2 yüzölçümündedir. 150'den fazla koloni içeren plakalar­da yaklaşık sayım yapılabilir, bunun için bir veya daha fazla kare içindeki kolonileri sayın ve kare başına ortalama sayıyı hesaplayın. Sonra bu ortalama sayıyı 20 ile çarpın, böylece Petrifilm plakası başına yaklaşık sayı bulunur.

Sayımı doğru yapabilmek için numuneyi tekrar sulandırmanız tavsiye edilir.

  Sayılamayacak Kadar Çok Sayıda (TNTC) Plakalar


Şekil 6: Sayılamayacak Kadar Çok Sayıda
(TNTC) Plakalar
  



Sayılamayacak kadar çok koloniler bulunan Petrifilm CC plakalarında aşağıda belirtilen özelliklerden biri veya birkaçı bulunur: Çok sayıda küçük koloni, çok sayıda gaz kabarcığı, jel renginin koyulaşması.



Şekil 7: Gaz üreten koloni sayısı: 4

  



Petrifilm CC plakasında Pseudomonas gibi koliform olmayan organizmalardan çok sayıda varsa, jelin rengi sarıya dönüşebilir.

  Kabarcıklar


Şekil 8: Gaz üreten koloni sayısı: 2
  



Gıda maddeleri tanecikleri düzensiz biçimlidir, gaz kabarcıkları ile bağlantılı değildir (bkz. l no.lu daire).



Şekil 9: Koloniye bağlı kabarcık şekilleri

  



Koloniye bağlı çeşitli kabarcıkların şekilleri gösterilmiştir. Bunların tümü koliform olarak sayılmalıdır.


3M™ Petrifilm™ Koliform Sayım Plakaları'nın Depolama, Numune Hazırlama, İnokülasyon, İnkübasyon ve Yorumlama notlarını görmek için tıklayınız.